Dermanê anthelmintîk N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) hate ragihandin ku AChE (acetylcholinesterase) asteng dike û ji ber vaskularîzasyona zêde xwedan taybetmendiyên kanserojen ên potansiyel e. Di vê gotarê de, em destnîşan dikin ku DEET bi taybetî hucreyên endothelial ên ku angiogenesis pêşve diçin, bi vî rengî mezinbûna tumor zêde dike. DEET pêvajoyên hucreyî yên ku rê li ber angiogenesis vedike, di nav de belavbûn, koçberî, û adhesionê çalak dike. Ev bi zêdebûna hilberîna NO û vegotina VEGF di hucreyên endothelial de ve girêdayî ye. Bêdengkirina M3 an jî karanîna înhîbîtorên M3-ya dermankolojîk van hemî bandoran betal kir, û destnîşan dike ku angiogenesisa ku ji hêla DEET ve hatî çêkirin hestiyar e M3. Ceribandinên ku di nav hucreyên endotelyal û HEK-ê de ku receptorên M3 zêde îfade dikin, nîşana kalsiyûmê vedihewînin, û her weha lêkolînên girêdan û girêdanê, destnîşan dikin ku DEET wekî modulatorek allosterîk a receptorên M3 tevdigere. Wekî din, DEET AChE asteng dike, bi vî rengî hebûna biyolojîk a acetylcholine û girêdana wê bi receptorên M3 re zêde dike, û bi rêziknameya allosterîk ve bandorên proangiogenîk zêde dike.
EC-yên seretayî ji aorta mişkên Swîsreyî hatin veqetandin. Rêbaza derxistinê ji protokola Kobayashi 26 hate adaptekirin. EC-yên mûrî di navgîniya EBM-2 de ku bi 5% FBS-ya neaktîfkirî ya germê heya derbasbûna çaremîn hat çandin.
Bandora du hûrgelên DEET li ser belavbûna HUVEC, U87MG, an BF16F10 bi karanîna Kîta Tehlîlkirina Belavbûna Hucreya CyQUANT (Sondeyên Molekuler, C7026) hate analîz kirin. Bi kurtasî, 5.103 hucreyên ji her bîrekê di nav plakaya 96-kanî de hatin çandin, destûr hate dayîn ku şevekê were girêdan, û dûv re 24 demjimêran bi DEET re hate derman kirin. Piştî rakirina navgîna mezinbûnê, çareseriya girêdana boyaxê li her kaniya mîkroplateyê zêde bikin û şaneyan di 37 °C de ji bo 30 hûrdeman înkuba bikin. Asta floransê bi karanîna xwendevanek mîkroplateya pirmode Mithras LB940 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Almanya) hate destnîşankirin ku bi parzûnên heyecanê 485 nm û fîlterên belavbûna 530 nm ve hatî çêkirin.
HUVEC di lewheyên 96-kaniyê de bi dendika 104 şaneyan di her bîrekê de hatin çandin. Hucreyên 24 saetan bi DEET re hatin derman kirin. Jiyana hucreyê bi karanîna rengdêrek MTT-ê (Sigma-Aldrich, M5655) hate nirxandin. Nirxên dendika optîkî li ser xwendevanek mîkroplateya pirmode (Mithras LB940) bi dirêjahiya pêlê 570 nm hatin wergirtin.
Bandorên DEET bi karanîna ceribandinên angiogenesis in vitro hatin lêkolîn kirin. Dermankirina bi 10-8 M an jî 10-5 M DEET di HUVECs de çêbûna dirêjahiya kapilaran zêde kir (Hêjîra 1a, b, barsên spî). Li gorî koma kontrolê, dermankirina bi giraniya DEET ji 10-14 heta 10-5 M nîşan da ku dirêjahiya kapîlar di 10-8 M DEET de gihîştiye deştek (Hêjîra Pêvek. S2). Di bandora proangiogenîk a in vitro ya HUVEC-ên ku bi DEET-ê re di navbêna 10-8 M û 10-5 M de têne derman kirin de cûdahiyek girîng nehat dîtin.
Ji bo destnîşankirina bandora DEET li ser neovascularîzasyonê, me lêkolînên neovascularîzasyonê di vivo de pêk anîn. Piştî 14 rojan, mêşên ku bi hucreyên endotelyal ên ku bi 10-8 M an 10-5 M DEET hatine çandin, zêdebûnek girîng di naveroka hemoglobînê de nîşan didin (Hêjî. 1c, barsên spî).
Wekî din, neovaskulerîzasyona DEET-ê li mêşên U87MG yên xenograft-hilgirên ku rojane (ip) bi DEET-ê re bi dozek ku tê zanîn ku tansiyonên plazmayê yên 10-5 M vedihewîne, ku di mirovên vekirî de normal e, dihatin derzî kirin, hate lêkolîn kirin. di 23. Tumorên detektîf (ango tumor >100 mm3) 14 roj piştî derzîlêdana şaneyên U87MG li mişkan hatin dîtin. Di roja 28-an de, mezinbûna tîmorê di mêşên ku bi DEET-dermankirî de hatine derman kirin bi mêşên kontrolê re bi girîngî zêde bû (Wêne. 1d, çargoşe). Wekî din, rengkirina CD31 ya tumoran destnîşan kir ku DEET bi girîngî qada kapîlar zêde kir lê ne dendika mîkrobatê. (Hêjîrê 1e–g).
Ji bo destnîşankirina rola reseptorên muskarînîk di zêdebûna DETA-yê de, 10-8 M an 10-5 M DETA di hebûna pFHHSiD (10-7 M, dijberê reseptora M3 ya bijartî) de hate bikar anîn. Dermankirina HUVEC. pFHHSiD taybetmendiyên zêdebûna DETA di hemî konsantrasyonan de bi tevahî asteng kir (Tabloya 1).
Di bin van şert û mercan de, me her weha lêkolîn kir ka DEET dê dirêjahiya kapilaran di hucreyên HUVEC de zêde bike. Bi heman rengî, pFHHSiD bi girîngî rê li ber dirêjahiya kapîlar a ku ji hêla DEET ve hatî çêkirin (Wêne. 1a, b, barên gewr) girt. Wekî din, ceribandinên mîna M3 siRNA hatin kirin. Her çend siRNA-ya kontrolê di pêşvebirina avakirina kapilaran de ne bandorker bû jî, bêdengkirina receptorê muscarinîk M3 şiyana DEET ji bo zêdekirina dirêjahiya kapilaran betal kir (Hêjî. 1a, b, barên reş).
Wekî din, hem 10-8 M an jî 10-5 M DEET-vascularization in vitro û neovascularization di vivo de bi tevahî ji hêla pFHHSiD ve hatin asteng kirin (Hêjîr. 1c, d, derdorên). Van encaman destnîşan dikin ku DEET angiogenezê bi rêgezek hesas a antagonîstên receptorên M3 an M3 siRNA yên bijartî pêşve dike.
AChE hedefa molekulê ya DEET e. Dermanên wekî donpezil, ku wekî mêtîngerên AChE tevdigerin, dikarin angiogeneza EC-ê di vitro û di modelên iskemiya piştê ya mişkî de teşwîq bikin14. Me bandora du hûrgelên DEET li ser çalakiya enzîma AChE li HUVEC ceriband. Kêm (10-8 M) û bilind (10-5 M) hûrgelên DEET li gorî şert û mercên kontrolê çalakiya AChE ya endothelial kêm kir (Wêne. 2).
Herdu hûrgelên DEET (10-8 M û 10-5 M) çalakiya acetylcholinesterase li ser HUVEC kêm kirin. BW284c51 (10-5 M) wekî kontrolek ji bo înhîbîtorên acetylcholinesterase hate bikar anîn. Encam wekî sedî çalakiya AChE ya li ser HUVEC-ê ku bi du hûrguliyên DEET-ê re li gorî hucreyên dermankirî yên wesayîtê têne derman kirin têne diyar kirin. Nirx wekî navîn ± SEM şeş ceribandinên serbixwe têne diyar kirin. *p <0,05 li gorî kontrolê (testa berhevdana piralî ya Kruskal-Wallis û Dunn).
Oksîdê nîtrîk (NO) di pêvajoya angiojenîk 33 de beşdar e, ji ber vê yekê, hilberîna NO di HUVEC-yên DEET-stimulkirî de hate lêkolîn kirin. Hilberîna NO ya endotelî ya bi DEET-ê hatî derman kirin li gorî şaneyên kontrolê zêde bû, lê tenê di dozek 10-8 M de gihîştiye girîngiyê (Hêjîrê. 3c). Ji bo destnîşankirina guheztinên molekulî yên ku hilberîna NO-ê ya ku ji hêla DEET ve hatî çêkirin kontrol dikin, vegotin û aktîvkirina eNOS bi blota Western ve hate analîz kirin. Her çend tedawiya DEET guheztina eNOS neguherand jî, ew bi girîngî fosforîlasyona eNOS li cîhê wê yê çalakker (Ser-1177) zêde kir dema ku cîhê xweya astengkirinê (Thr-495) li gorî şaneyên nehatî dermankirin di fosforîlasyona eNOS de kêm kir (Hêjîrê. 3d). Digel vê yekê, rêjeya eNOS-a fosforilated li cîhê çalakkirinê û cîhê astengkirinê piştî normalîzekirina mîqdara eNOS-a fosforilated bi tevahî mîqdara enzîmê hate hesibandin. Ev rêje di HUVECsên ku bi her giraniya DEET re hatine derman kirin li gorî şaneyên nehatî derman kirin bi girîngî zêde bû (Wêne. 3d).
Di dawiyê de, vegotina VEGF, yek ji faktorên sereke yên proangiogenîk, ji hêla Western blotting ve hate analîz kirin. DEET bi girîngî îfadeya VEGF zêde kir, lê pFHHSiD bi tevahî vê îfadeyê asteng kir.
Ji ber ku bandorên DEET hem ji bloka dermankolojîk û hem jî kêmkirina receptorên M3 re hesas in, me hîpoteza ku dibe ku DEET nîşana kalsiyûmê zêde bike ceriband. Ecêb e, DEET bi ser neket ku kalsiyûmê sîtoplazmî di HUVEC (daneyên nayên xuyang kirin) û HEK/M3 (Hêjî. 4a, b) de ji bo her du tansiyonên hatine bikar anîn zêde bike.
Dema şandinê: Dec-30-2024