Dermanê dijî-helmintîk N,N-diethyl-m-toluamideDEET) hatiye ragihandin ku AChE (asetilkolînesteraz) asteng dike û ji ber vaskulerasyona zêde xwedî taybetmendiyên potansiyel ên kanserojenîk e. Di vê gotarê de, em nîşan didin ku DEET bi taybetî şaneyên endotelê teşwîq dike ku anjîyogenezê pêşve dixin, bi vî rengî mezinbûna tumor zêde dike. DEET pêvajoyên şaneyê yên ku dibin sedema anjîyogenezê çalak dike, di nav de pirbûn, koçberî û girêdan. Ev bi zêdebûna hilberîna NO û îfadeya VEGF di şaneyên endotelê de ve girêdayî ye. Bêdengkirina M3 an karanîna astengkerên M3 yên farmakolojîk van hemî bandoran ji holê rakir, ku pêşniyar dike ku anjîyogeneza ku ji hêla DEET ve hatî çalak kirin hesas e ji bo M3. Ceribandinên ku tê de sînyala kalsiyûmê di şaneyên endotelê û HEK de hene ku reseptorên M3 zêde îfade dikin, û her weha lêkolînên girêdan û docking, nîşan didin ku DEET wekî modulatorek alosterîk a reseptorên M3 tevdigere. Wekî din, DEET AChE asteng dike, bi vî rengî biyoyarbûna asetilkolînê û girêdana wê bi reseptorên M3 re zêde dike, û bandorên proanjîyojenîk bi rêya rêziknameya alosterîk zêde dike.
EC-yên seretayî ji aortaya mişkên Swîsreyî hatin veqetandin. Rêbaza derxistinê ji protokola Kobayashi 26 hat adaptekirin. EC-yên mişk heta derbasbûna çaremîn di navgîna EBM-2 de ku bi %5 FBS-ya bêbandorkirî ya germê hatiye zêdekirin hatin çandin.
Bandora du konsantrasyonên DEET li ser zêdebûna HUVEC, U87MG, an BF16F10 bi karanîna CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit (Molecular Probes, C7026) hate analîzkirin. Bi kurtasî, 5.103 xane ji bo her bîrekê di plakaya 96-bîrekê de hatin çandin, hiştin ku bi şev ve girêdayî bibin, û dûv re 24 demjimêran bi DEET hatin dermankirin. Piştî rakirina navgîniya mezinbûnê, çareseriya girêdana boyaxê li her bîrekê ya mîkroplêkê zêde bikin û xaneyan 30 hûrdeman di 37°C de înkubasyon bikin. Asta fluoresansê bi karanîna xwendevanek mîkroplêka pirmodî ya Mithras LB940 (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Almanya) ku bi fîlterên teşwîqkirina 485 nm û fîlterên emîsyonê yên 530 nm ve hatî sazkirin, hate destnîşankirin.
HUVEC di plakayên 96-qulikî de bi dendika 104 şaneyan di her qulikê de hatin çandin. Xane 24 demjimêran bi DEET hatin dermankirin. Jiyana şaneyan bi karanîna ceribandina MTT ya kolorimetrîk (Sigma-Aldrich, M5655) hate nirxandin. Nirxên dendika optîkî li ser xwendevanek mîkroplêya pirmodî (Mithras LB940) di dirêjahiya pêlê ya 570 nm de hatin bidestxistin.
Bandorên DEET bi karanîna ceribandinên anjîyogenezê yên in vitro hatin lêkolînkirin. Dermankirina bi 10-8 M an 10-5 M DEET çêbûna dirêjahiya kapîlar di HUVEC-an de zêde kir (Wêne 1a, b, xêzên spî). Li gorî koma kontrolê, dermankirina bi konsantrasyonên DEET-ê yên ji 10-14 heta 10-5 M nîşan da ku dirêjahiya kapîlar gihîştiye platoyek li 10-8 M DEET (Wêneya Pêvek S2). Di bandora proanjîyojenîk a in vitro ya HUVEC-ên ku bi DEET-ê di rêjeya konsantrasyonê ya 10-8 M û 10-5 M de hatine dermankirin de ti cûdahiyek girîng nehat dîtin.
Ji bo diyarkirina bandora DEET li ser neovaskularîzasyonê, me lêkolînên neovaskularîzasyonê yên in vivo pêk anîn. Piştî 14 rojan, mişkên ku hucreyên endotelê yên pêş-çandî bi 10-8 M an 10-5 M DEET ve hatine derzîkirin, zêdebûnek girîng di naveroka hemoglobînê de nîşan dan (Wêne 1c, xêzên spî).
Her wiha, neovaskularîzasyona ji hêla DEET ve hatî çalakkirin li mişkên ku xenograftên U87MG hildigirin, ku rojane (ip) bi DEET bi dozeke ku tê zanîn ku konsantrasyonên plazmayê yên 10-5 M çêdike, ku di mirovên ku rastî vê nexweşiyê hatine de normal e, hatine lêkolînkirin. 23. Tumorên tespîtkirî (ango tumor >100 mm3) 14 roj piştî derzîkirina hucreyên U87MG nav mişkan hatin dîtin. Di roja 28an de, mezinbûna tumorê di mişkên ku bi DEET hatine dermankirin de li gorî mişkên kontrolê bi girîngî zêde bû (Wêne 1d, çargoşe). Her wiha, boyaxkirina tumoran bi CD31 nîşan da ku DEET bi girîngî qada kapîlar zêde kiriye lê ne dendika mîkrodamaran. (Wêne 1e–g).
Ji bo destnîşankirina rola reseptorên muskarînîk di zêdebûna ji hêla DETA ve hatî çalak kirin de, 10-8 M an 10-5 M DETA di hebûna pFHHSiD (10-7 M, dijberê reseptora M3 ya bijartî) de hate bikar anîn. Dermankirina HUVEC. pFHHSiD taybetmendiyên zêdebûna DETA di hemî konsantrasyonan de bi tevahî asteng kir (Tabloya 1).
Di bin van mercan de, me her wiha lêkolîn kir ka DEET dê dirêjahiya kapîlar di hucreyên HUVEC de zêde bike an na. Bi heman awayî, pFHHSiD bi girîngî rê li ber dirêjahiya kapîlar a ji hêla DEET ve hatî çêkirin girt (Wêne 1a, b, xêzên gewr). Wekî din, ceribandinên wekhev bi siRNA ya M3 re hatin kirin. Her çend siRNA ya kontrolê di pêşvebirina avakirina kapîlar de ne bandorker bû jî, bêdengkirina reseptora muskarînîk a M3 şiyana DEET ya zêdekirina dirêjahiya kapîlar ji holê rakir (Wêne 1a, b, xêzên reş).
Herwiha, hem vaskularîzasyona ji hêla 10-8 M an 10-5 M DEET ve di vitro de û hem jî neovaskularîzasyona di vivo de ji hêla pFHHSiD ve bi tevahî hatin asteng kirin (Wêne 1c, d, çember). Ev encam nîşan didin ku DEET anjîyogenezê bi rêya rêyek hesas a li hember dijberên wergirên M3 yên bijartî an jî siRNA ya M3 pêş dixe.
AChE hedefa molekulî ya DEET e. Dermanên wekî donepezil, ku wekî astengkerên AChE tevdigerin, dikarin anjîyogeneza EC in vitro û di modelên îskemiya lingên paşîn ên mişk de teşwîq bikin14. Me bandora du konsantrasyonên DEET li ser çalakiya enzîma AChE di HUVEC de ceriband. Konsantrasyonên kêm (10-8 M) û bilind (10-5 M) yên DEET çalakiya AChE ya endotelê li gorî şert û mercên kontrolê kêm kirin (Wêne 2).
Herdu konsantrasyonên DEET (10-8 M û 10-5 M) çalakiya asetilkolînestêrazê li ser HUVEC kêm kirin. BW284c51 (10-5 M) wekî kontrolek ji bo astengkerên asetilkolînestêrazê hate bikar anîn. Encam wekî rêjeya çalakiya AChE li ser HUVEC-a ku bi du konsantrasyonên DEET-ê re hatine dermankirin li gorî hucreyên ku bi wesayîtê hatine dermankirin têne îfade kirin. Nirx wekî navînî ± SEM ya şeş ceribandinên serbixwe têne îfade kirin. *p < 0.05 li gorî kontrolê (ceribandina berawirdkirina pirjimar a Kruskal-Wallis û Dunn).
Oksîda nîtrîk (NO) di pêvajoya anjîyojenîk de beşdar e 33, ji ber vê yekê, hilberîna NO di HUVEC-ên bi DEET-ê hatine teşwîqkirin de hate lêkolîn kirin. Hilberîna NO ya endotelê ya bi DEET-ê hatî dermankirin li gorî hucreyên kontrolê zêde bû, lê tenê di dozek 10-8 M de gihîşt girîngiyê (Wêne 3c). Ji bo destnîşankirina guhertinên molekulî yên ku hilberîna NO ya bi DEET-ê hatî çêkirin kontrol dikin, îfade û aktîvkirina eNOS bi Western blotting hatin analîz kirin. Her çend dermankirina DEET îfadeya eNOS neguherand jî, wê fosforîlasyona eNOS li cîhê aktîvkirina wê (Ser-1177) bi girîngî zêde kir dema ku cîhê wê yê astengker (Thr-495) li gorî hucreyên nedermankirî di fosforîlasyona eNOS de kêm kir (Wêne 3d). Wekî din, rêjeya eNOS-ya fosforîlekirî li cîhê aktîvkirinê û cîhê astengker piştî normalîzekirina mîqdara eNOS-ya fosforîlekirî bi tevahî mîqdara enzîmê re hate hesab kirin. Ev rêje di HUVEC-ên ku bi her konsantrasyona DEET-ê hatine dermankirin de li gorî hucreyên nedermankirî bi girîngî zêde bû (Wêne 3d).
Di dawiyê de, îfadeya VEGF, yek ji faktorên sereke yên proanjîyojenîk, bi Western blotting hate analîzkirin. DEET îfadeya VEGF bi girîngî zêde kir, lê pFHHSiD bi tevahî vê îfadeyê asteng kir.
Ji ber ku bandorên DEET hem ji bo astengkirina farmakolojîk û hem jî ji bo kêmkirina reseptorên M3 hesas in, me hîpoteza ku DEET dibe ku sînyala kalsiyûmê zêde bike ceriband. Bi awayekî ecêb, DEET di her du konsantrasyonên ku hatine bikar anîn de kalsiyûma sîtoplazmayî di HUVEC (dane nehatine nîşandan) û HEK/M3 (Wêne 4a, b) de zêde nekir.
Dema şandinê: 30ê Kanûna Pêşîn a 2024an