Mezinbûna meristema apîkal a şitilan (SAM) ji bo mîmariya stûnê girîng e. Hormonên nebatangibberellin(GA) di hevrêzkirina mezinbûna nebatan de rolên sereke dilîzin, lê rola wan di SAM de hîn jî baş nayê famkirin. Li vir, me biyosensorek ratiometrîk a sînyala GA bi endezyariya proteîna DELLA pêşxist da ku fonksiyona wê ya bingehîn a rêziknameyê di bersiva transkrîpsiyonê ya GA de were tepeserkirin di heman demê de hilweşîna wê piştî naskirina GA biparêze. Em nîşan didin ku ev biyosensora bingeha hilweşînê guhertinên di astên GA û hestiyariya hucreyî de di dema pêşveçûnê de bi rastî tomar dike. Me ev biyosensor bikar anî da ku çalakiya sînyala GA di SAM de nexşe bike. Em nîşan didin ku sînyalên GA yên bilind bi giranî di hucreyên di navbera primordia organan de hene, ku pêşengên hucreyên internodê ne. Bi karanîna nêzîkatiyên qezenc- û windakirina-fonksiyonê, em bêtir nîşan didin ku GA arasteya balafirê dabeşkirina hucreyê rêk dixe, rêxistina hucreyî ya kanonîk a internodan ava dike, bi vî rengî taybetmendiya internodê di SAM de pêş dixe.
Meristema apîkal a guleyê (SAM), ku li serê guleyê ye, nişkek ji şaneyên reh dihewîne ku çalakiya wan organên alî û girêkên reh bi awayekî modular û dubarekirî di tevahiya jiyana nebatê de çêdike. Her yek ji van yekîneyên dubare, an girêkên nebatan, navgirêk û organên alî li girêkan, û meristemên aksîler di nav aksîlên pelan de vedihewîne1. Mezinbûn û rêxistina girêkên nebatan di dema pêşveçûnê de diguhere. Di Arabidopsis de, mezinbûna navgirêk di qonaxa vegjetasyonê de tê tepeserkirin, û meristemên aksîler di nav aksîlên pelên rozetan de bêçalak dimînin. Di dema veguheztina qonaxa kulîlkê de, SAM dibe meristema kulîlkvedanê, navgirêkên dirêjkirî û gulên aksîler, şaxên di nav aksîlên pelên kulîlkê de, û paşê, kulîlkên bêpel2 çêdike. Her çend me di têgihîştina mekanîzmayên ku destpêkirina pel, kulîlk û şaxan kontrol dikin de pêşkeftinek girîng çêkiribe jî, di derbarê ka navgirêk çawa çêdibin de nisbeten hindik tê zanîn.
Têgihîştina belavbûna cihî-demî ya GAyan dê bibe alîkar ku fonksiyonên van hormonan di tevnên cûda û di qonaxên pêşketinê yên cûda de çêtir werin fêm kirin. Dîtbarîkirina hilweşîna hevgirtina RGA-GFP-ê ya ku di bin bandora promotera xwe de tê îfade kirin, agahdariya girîng li ser rêkxistina asta GA ya giştî di kokan de peyda dike15,16. Lêbelê, îfadeya RGA li seranserê tevnên cûda diguhere17 û ji hêla GA18 ve tê rêve kirin. Bi vî rengî, îfadeya cûda ya promotera RGA dibe ku bibe sedema qaliba fluoresansê ya ku bi RGA-GFP-ê re tê dîtin û ji ber vê yekê ev rêbaz ne hejmarî ye. Di demên dawî de, GA19,20-ya biyoaktîv a bi fluorescein (Fl)-nîşankirî kombûna GA di endokorteksa kokê de û rêkxistina asta hucreyî ya wê ji hêla veguhastina GA ve eşkere kir. Di demên dawî de, sensora GA FRET nlsGPS1 nîşan da ku asta GA bi dirêjkirina hucreyê di kokan, fîlamentan û hîpokotîlên tarî de re têkildar e21. Lêbelê, wekî ku me dît, konsantrasyona GA ne tenê parametreya ku çalakiya sînyala GA kontrol dike ye, ji ber ku ew bi pêvajoyên hestiyariyê yên tevlihev ve girêdayî ye. Li vir, li ser bingeha têgihîştina me ya rêyên îşaretkirina DELLA û GA, em pêşkeftin û taybetmendiya biyosensorek ratiometrik a li ser bingeha hilweşînê ji bo îşaretkirina GA radigihînin. Ji bo pêşxistina vê biyosensora hejmarî, me RGA-yek mutant a hesas a GA-yê bikar anî ku bi proteînek floresan ve hatibû girêdan û li her derê di tevnvîsan de dihat îfadekirin, û her weha proteînek floresan a bêhesas a GA-yê bikar anî. Em nîşan didin ku hevgirtinên proteîna RGA-ya mutant dema ku li her derê tê îfadekirin, mudaxeleyî îşaretkirina GA-ya endojîn nakin, û ku ev biyosensor dikare çalakiya îşaretkirinê ya ku ji hem têketina GA û hem jî pêvajoya îşareta GA ji hêla cîhaza hestkirinê ve bi çareseriya cîh-demkî ya bilind çêdibe bipîve. Me ev biyosensor bikar anî da ku belavkirina cîh-demkî ya çalakiya îşaretkirina GA nexşe bikin û bipîvin ka GA çawa tevgera hucreyî di epidermisa SAM de rêk dixe. Em nîşan didin ku GA arasteya balafira dabeşkirinê ya hucreyên SAM-ê yên di navbera primordia organan de rêk dixe, bi vî rengî rêxistina hucreyî ya kanonîk a navbernodê diyar dike.
Di dawiyê de, me pirsî gelo qmRGA dikare guhertinên di asta GA ya endojîn de bi karanîna hîpokotîlên mezinbûnê rapor bike. Me berê nîşan da ku nîtrat bi zêdekirina senteza GA û, di encamê de, hilweşîna DELLA34 mezinbûnê teşwîq dike. Li gorî vê, me dît ku dirêjahiya hîpokotîlê di nebatên pUBQ10::qmRGA de ku di bin dabînkirina nîtratê ya zêde (10 mM NO3−) de mezin dibin, ji ya nebatên ku di bin şert û mercên kêmasiya nîtratê de mezin dibin, pir dirêjtir bû (Wêneya Pêvek 6a). Li gorî bersiva mezinbûnê, sînyalên GA di hîpokotîlên nebatên ku di bin şert û mercên 10 mM NO3− de mezin dibin de ji nebatên ku di nebûna nîtratê de mezin dibin bilindtir bûn (Wêneya Pêvek 6b, c). Bi vî rengî, qmRGA di heman demê de çavdêriya guhertinên di sînyala GA de dike ku ji hêla guhertinên endojîn di konsantrasyona GA de têne çêkirin.
Ji bo fêmkirina ka çalakiya sînyala GA ya ku ji hêla qmRGA ve hatî tespîtkirin bi konsantrasyona GA û têgihîştina GA ve girêdayî ye, wekî ku li gorî sêwirana sensorê tê hêvîkirin, me îfadeya sê wergirên GID1 di tevnên vejeteryan û hilberandinê de analîz kir. Di nebatan de, xeta raporterê GID1-GUS nîşan da ku GID1a û c di kotiledonan de pir zêde têne îfade kirin (Wêne 3a–c). Wekî din, her sê wergir di pelan, primordia koka lateral, serê kokê (ji bilî qapaxa kokê ya GID1b), û pergala damarî de têne îfade kirin (Wêne 3a–c). Di SAM-a kulîlkan de, me tenê sînyalên GUS ji bo GID1b û 1c tespît kirin (Wêneya Pêvek 7a–c). Hîbrîdasyona di cîh de van şêwazên îfadeyê piştrast kir û bêtir nîşan da ku GID1c bi rengek yekreng di astên nizm de di SAM de tê îfade kirin, lê GID1b li derdora SAM îfadeyek bilindtir nîşan da (Wêneya Pêvek 7d–l). Hevgirtina wergerî ya pGID1b::2xmTQ2-GID1b her wiha rêzek derecekirî ya îfadeya GID1b eşkere kir, ji îfadeya kêm an bê îfade li navenda SAM heta îfadeya bilind li sînorên organan (Wêneya Pêvek 7m). Bi vî awayî, wergirên GID1 bi awayekî yekreng li seranserê û di nav tevnvîsan de nayên belavkirin. Di ceribandinên paşîn de, me her wiha dît ku zêde îfadeya GID1 (pUBQ10::GID1a-mCherry) hesasiyeta qmRGA di hîpokotîlan de li hember serîlêdana GA ya derveyî zêde kir (Wêne 3d, e). Berevajî vê, fluoresansa ku ji hêla qd17mRGA ve di hîpokotîlê de hatî pîvandin li hember dermankirina GA3 bêhesas bû (Wêne 3f, g). Ji bo her du ceribandinan, nebat bi konsantrasyonên bilind ên GA (100 μM GA3) hatin dermankirin da ku tevgera bilez a sensorê were nirxandin, ku tê de şiyana girêdana bi wergirê GID1 re zêde bû an winda bû. Bi hev re, ev encam piştrast dikin ku biyosensorê qmRGA fonksiyonek hevbeş wekî sensorek GA û GA pêk tîne, û pêşniyar dikin ku îfadeya cûda ya reseptora GID1 dikare bi girîngî emîsîtîfa sensorê modûl bike.
Heta niha, belavbûna sînyalên GA di SAM de ne diyar e. Ji ber vê yekê, me nebatan ku qmRGA-ê îfade dikin û raporvanê hucreya reh a pCLV3::mCherry-NLS35 bikar anîn da ku nexşeyên hejmarî yên çareseriya bilind ên çalakiya sînyala GA hesab bikin, bi balkişandina ser qata L1 (epidermis; Wêne 4a, b, li Rêbaz û Rêbazên Pêvek binêre), ji ber ku L1 rolek sereke di kontrolkirina mezinbûna SAM de dilîze36. Li vir, îfadeya pCLV3::mCherry-NLS xalek referansa geometrîkî ya sabît peyda kir ji bo analîzkirina belavbûna cihî-demkî ya çalakiya sînyala GA37. Her çend GA ji bo pêşkeftina organên alî girîng tê hesibandin4, me dît ku sînyalên GA di primordiuma kulîlkan (P) de kêm bûn ku ji qonaxa P3 dest pê dikin (Wêne 4a, b), lê primordiumên ciwan ên P1 û P2 çalakiyek nerm a mîna ya herêma navendî hebû (Wêne 4a, b). Çalakiya sînyala GA ya bilindtir li sînorên primordiumê yên organan hate tespîtkirin, ku ji P1/P2 (li kêlekên sînor) dest pê kir û li P4 gihîşt lûtkeyê, û her weha di hemî şaneyên herêma periferîk a di navbera primordiumê de cih digire (Wêne 4a, b û Wêneya Pêvek 8a, b). Ev çalakiya sînyala GA ya bilindtir ne tenê di epidermisê de lê di heman demê de di qatên L2 û jorîn ên L3 de jî hate dîtin (Wêneya Pêvek 8b). Şêweya sînyalên GA yên ku di SAM-ê de bi karanîna qmRGA-yê hatine tespîtkirin jî di demê re neguherî ma (Wêneya Pêvek 8c–f, k). Her çend avahiya qd17mRGA di SAM-ê ya nebatan T3 de ji pênc xetên serbixwe yên ku me bi hûrgulî destnîşan kirin bi awayekî sîstematîk hate kêmkirin, em karîn şêwazên fluoresansê yên ku bi avahiya pRPS5a::VENUS-2A-TagBFP (Wêneya Pêvek 8g–j, l) hatine bidestxistin analîz bikin. Di vê xeta kontrolê de, tenê guhertinên piçûk di rêjeya fluoresansê de di SAM de hatin tespît kirin, lê di navenda SAM de me kêmbûnek zelal û nediyar a VENUS-ê ya bi TagBFP-ê ve girêdayî dît. Ev yek piştrast dike ku qaliba sînyalê ya ku ji hêla qmRGA ve tê dîtin hilweşîna mRGA-VENUS-ê ya girêdayî GA nîşan dide, lê di heman demê de nîşan dide ku qmRGA dibe ku çalakiya sînyala GA-yê di navenda merîstemê de zêde binirxîne. Bi kurtasî, encamên me qalibek sînyala GA-yê eşkere dikin ku di serî de belavbûna primordia-yê nîşan dide. Ev belavbûna herêma navbera-primordiyal (IPR) ji ber avakirina gav bi gav a çalakiya sînyala GA-yê ya bilind di navbera primordium-a pêşkeftî û herêma navendî de ye, di heman demê de çalakiya sînyala GA-yê di primordium-ê de kêm dibe (Wêne 4c, d).
Belavbûna reseptorên GID1b û GID1c (li jor binêre) nîşan dide ku îfadeya cuda ya reseptorên GA dibe alîkar ku şêweya çalakiya sînyala GA di SAM de şekil bide. Me meraq kir ka gelo kombûna cuda ya GA dibe ku têkildar be. Ji bo lêkolîna vê îhtîmalê, me sensora nlsGPS1 GA FRET21 bikar anî. Frekansa çalakkirinê ya zêde di SAM-a nlsGPS1-ê de ku bi 10 μM GA4+7 ji bo 100 hûrdeman hate dermankirin hate tespît kirin (Wêneya Pêvek 9a-e), ku nîşan dide ku nlsGPS1 bersivê dide guhertinên di konsantrasyona GA di SAM-ê de, wekî ku di kokan de dike21. Belavbûna fezayî ya frekansa çalakkirina nlsGPS1 astên GA yên nisbeten kêm di tebeqeyên derveyî yên SAM-ê de eşkere kir, lê nîşan da ku ew di navend û li sînorên SAM-ê de bilind bûne (Wêneya 4e û Wêneya Pêvek 9a,c). Ev nîşan dide ku GA di SAM-ê de jî bi şêweyek fezayî ya ku bi ya ku ji hêla qmRGA ve hatî eşkere kirin re tê berhev kirin, belav dibe. Wekî rêbazek temamker, me SAM bi GA-ya floresan (GA3-, GA4-, GA7-Fl) an jî bi tenê Fl wekî kontrolek neyînî derman kir. Sînyala Fl li seranserê SAM-ê, tevî herêma navendî û primordiumê, belav bû, her çend bi şîddetek kêmtir be jî (Wêne 4j û Wêneya Pêvek 10d). Berevajî vê, her sê GA-Fl bi taybetî di nav sînorên primordiumê de û bi rêjeyên cûda di mayîna IPR-ê de kom bûn, û GA7-Fl di domaina herî mezin a di IPR-ê de kom bû (Wêne 4k û Wêneya Pêvek 10a,b). Pîvandina şîddeta floresansê eşkere kir ku rêjeya şîddeta IPR-ê beramberî şîddeta ne-IPR di SAM-ya bi GA-Fl ve hatî dermankirin de li gorî SAM-ya bi Fl ve hatî dermankirin bilindtir bû (Wêne 4l û Wêneya Pêvek 10c). Bi hev re, ev encam pêşniyar dikin ku GA di hucreyên IPR-ê de ku herî nêzîkî sînorê organan in, di konsantrasyonên bilindtir de heye. Ev yek nîşan dide ku şêweya çalakiya sînyala SAM GA hem ji îfadeya cihêreng a reseptorên GA û hem jî ji kombûna cihêreng a GA di hucreyên IPR de nêzîkî sînorên organan çêdibe. Bi vî awayî, analîza me şêweyek cihî-demkî ya neçaverêkirî ya sînyala GA eşkere kir, bi çalakiyek kêmtir li navend û destpêka SAM û çalakiyek bilindtir di IPR de li herêma periferîk.
Ji bo fêmkirina rola çalakiya sînyala GA ya cuda di SAM de, me têkiliya di navbera çalakiya sînyala GA, berfirehbûna şaneyê û dabeşbûna şaneyê de bi karanîna wênekirina demkî ya rast-dem a SAM qmRGA pCLV3::mCherry-NLS analîz kir. Ji ber rola GA di rêkxistina mezinbûnê de, tê payîn ku têkiliyek erênî bi parametreyên berfirehbûna şaneyê re hebe. Ji ber vê yekê, me pêşî nexşeyên çalakiya sînyala GA bi nexşeyên rêjeya mezinbûna rûyê şaneyê re (wekî cîgirek ji bo hêza berfirehbûna şaneyê ji bo şaneyek diyarkirî û ji bo şaneyên keç di dabeşbûnê de) û bi nexşeyên anîzotropiya mezinbûnê re, ku rêça berfirehbûna şaneyê dipîve (li vir ji bo şaneyek diyarkirî û ji bo şaneyên keç di dabeşbûnê de jî tê bikar anîn; Wêne 5a,b, li Rêbaz û Rêbazên Pêvek binêre) berawird kir. Nexşeyên me yên rêjeya mezinbûna rûyê şaneya SAM bi çavdêriyên berê re lihevhatî ne38,39, bi rêjeyên mezinbûna herî kêm li sînor û rêjeyên mezinbûna herî zêde di kulîlkên pêşkeftî de (Wêne 5a). Analîza pêkhateya sereke (PCA) nîşan da ku çalakiya sînyala GA bi tundiya mezinbûna rûyê şaneyê re bi rengek neyînî ve girêdayî ye (Wêne 5c). Me her wiha nîşan da ku eksên sereke yên guherînê, tevî têketina sînyala GA û şîdeta mezinbûnê, li gorî rêça ku ji hêla îfadeya bilind a CLV3 ve hatî destnîşankirin ortogonal bûn, ku di analîzên mayî de derxistina hucreyan ji navenda SAM piştrast kir. Analîza koralasyonê ya Spearman encamên PCA piştrast kir (Wêne 5d), ku nîşan dide ku sînyalên GA yên bilindtir di IPR de nebûne sedema berfirehbûna hucreyê ya bilindtir. Lêbelê, analîza koralasyonê koralasyonek sivik a erênî di navbera çalakiya sînyala GA û anîzotropiya mezinbûnê de eşkere kir (Wêne 5c, d), ku pêşniyar dike ku sînyala GA ya bilindtir di IPR de bandorê li rêça mezinbûna hucreyê û dibe ku pozîsyona balafira dabeşbûna hucreyê dike.
a, b Nexşeyên germê yên mezinbûna rûberê navîn (a) û anîzotropiya mezinbûnê (b) di SAM de li ser heft nebatan serbixwe navînî bûn (bi rêzê ve wekî nûner ji bo hêz û rêça berfirehbûna şaneyê têne bikar anîn). c Analîza PCA guherbarên jêrîn dihewîne: sînyala GA, şîdeta mezinbûna rûberê, anîzotropiya mezinbûna rûberê, û îfadeya CLV3. Pêkhateya PCA 1 bi giranî bi şîdeta mezinbûna rûberê re bi awayekî neyînî ve girêdayî bû û bi sînyala GA re bi awayekî erênî ve girêdayî bû. Pêkhateya PCA 2 bi giranî bi anîzotropiya mezinbûna rûberê re bi awayekî erênî ve girêdayî bû û bi îfadeya CLV3 re bi awayekî neyînî ve girêdayî bû. Rêje guherîna ku ji hêla her pêkhateyê ve tê ravekirin temsîl dikin. d Analîza koralasyona Spearman di navbera sînyala GA, şîdeta mezinbûna rûberê, û anîzotropiya mezinbûna rûberê de li pîvana tevnê bêyî CZ. Hejmara li rastê nirxa Spearman rho di navbera du guherbaran de ye. Stêrk rewşên ku koralasyon/koralasyona neyînî pir girîng e nîşan didin. e Dîtbarîkirina 3D ya şaneyên Col-0 SAM L1 bi mîkroskopiya konfokal. Dîwarên şaneyên nû yên ku di SAMê de (lê ne di primordiumê de) di 10 demjimêran de çêdibin li gorî nirxên goşeya wan têne rengkirin. Şêweya rengîn li quncikê rastê yê jêrîn tê nîşandan. Wêneya hundir wêneya 3D ya têkildar di 0 demjimêran de nîşan dide. Ceribandin du caran bi encamên wekhev hate dubarekirin. f Nexşeyên qutiyê rêjeyên dabeşbûna şaneyan di IPR û ne-IPR Col-0 SAM (n = 10 nebatên serbixwe) de nîşan didin. Xeta navendî navîn nîşan dide, û sînorên qutiyê sedî 25 û 75 nîşan didin. Çirçik nirxên herî kêm û herî zêde yên ku bi nermalava R hatine destnîşankirin nîşan didin. Nirxên P bi testa t-ya du-alî ya Welch hatin bidestxistin. g, h Nexşeya şematîk nîşan dide ku (g) çawa goşeya dîwarê şaneya nû (magenta) li gorî rêça radyal ji navenda SAMê (xeta xalxalî ya spî) tê pîvandin (tenê nirxên goşeya tûj, ango 0-90°, têne hesibandin), û (h) rêçeyên dorhêl/alîkî û radyal di nav merîstemê de. i Hîstografên frekansê yên arasteya plana dabeşbûna şaneyê li seranserê SAM (şînê tarî), IPR (şînê navîn), û ne-IPR (şînê vekirî), bi rêzê ve. Nirxên P bi ceribandina Kolmogorov-Smirnov a du-alî hatin bidestxistin. Ceribandin du caran bi encamên wekhev hate dubarekirin. j Hîstografên frekansê yên arasteya plana dabeşbûna şaneyê ya IPR li dora P3 (keskê vekirî), P4 (keskê navîn), û P5 (keskê tarî), bi rêzê ve. Nirxên P bi ceribandina Kolmogorov-Smirnov a du-alî hatin bidestxistin. Ceribandin du caran bi encamên wekhev hate dubarekirin.
Ji ber vê yekê, me paşê bi destnîşankirina dîwarên şaneyên nû çêbûyî di dema ceribandinê de têkiliya di navbera sînyala GA û çalakiya dabeşbûna şaneyan de lêkolîn kir (Wêne 5e). Vê rêbazê rê da me ku em frekans û rêça dabeşbûna şaneyan bipîvin. Bi awayekî ecêb, me dît ku frekans dabeşbûna şaneyan di IPR û mayî ya SAM (ne-IPR, Wêne 5f) de dişibihe hev, ku nîşan dide ku cûdahiyên di sînyala GA de di navbera şaneyên IPR û ne-IPR de bandorek girîng li ser dabeşbûna şaneyan nakin. Ev, û têkiliya erênî di navbera sînyala GA û anîzotropiya mezinbûnê de, me han da ku em bifikirin ka çalakiya sînyala GA dikare bandorê li rêça balafira dabeşbûna şaneyan bike. Me arasteya dîwarê şaneya nû wekî goşeyek tûj li gorî eksena radyal a ku navenda merîstemê û navenda dîwarê şaneya nû bi hev ve girêdide pîvand (Wêne 5e-i) û meylek zelal a dabeşbûna şaneyan li goşeyên nêzîkî 90° li gorî eksena radyal dît, bi frekansên herî bilind li 70-80° (23.28%) û 80-90° (22.62%) hatin dîtin (Wêne 5e,i), ku bi dabeşbûna şaneyan di rêça dorhêl/berfireh de re têkildar in (Wêne 5h). Ji bo lêkolîna beşdariya sînyala GA di vê tevgera dabeşbûna şaneyê de, me parametreyên dabeşbûna şaneyan di IPR û ne-IPR de ji hev cuda analîz kirin (Wêne 5i). Me dît ku belavbûna goşeya dabeşkirinê di hucreyên IPR de ji ya hucreyên ne-IPR an jî di hucreyên di tevahiya SAM de cuda ye, hucreyên IPR rêjeyek bilindtir a dabeşkirinên hucreyên alî/dorhêl nîşan didin, ango, 70-80° û 80-90° (bi rêzê ve 33.86% û 30.71%, rêjeyên têkildar) (Wêne 5i). Bi vî awayî, çavdêriyên me têkiliyek di navbera sînyala GA ya bilind û arasteya balafira dabeşkirina hucreyê ya nêzîkî arasteya dorhêl de eşkere kirin, dişibihe têkiliya di navbera çalakiya sînyala GA û anîzotropiya mezinbûnê de (Wêne 5c, d). Ji bo ku em parastina cîhî ya vê têkiliyê bêtir saz bikin, me arasteya balafira dabeşkirinê di hucreyên IPR de ku ji P3 dest pê dikin li dora primordiumê pîva, ji ber ku çalakiya sînyala GA ya herî bilind di vê herêmê de ji P4 dest pê dike hate tespît kirin (Wêne 4). Goşeyên dabeşkirinê yên IPR li dora P3 û P4 cûdahiyên girîng ên îstatîstîkî nîşan nedan, her çend frekansek zêde ya dabeşkirinên hucreyên alî di IPR de li dora P4 hate dîtin (Wêne 5j). Lêbelê, di hucreyên IPR-ê yên li dora P5-ê de, cudahiya di arasteya plana dabeşbûna hucreyê de ji hêla îstatîstîkî ve girîng bû, bi zêdebûnek tûj di pirbûna dabeşbûnên hucreyê yên transversal de (Wêne 5j). Bi hev re, ev encam pêşniyar dikin ku sînyala GA dikare arasteya dabeşbûnên hucreyê di SAM-ê de kontrol bike, ku ev yek bi raporên berê re lihevhatî ye40,41 ku sînyala GA-ya bilind dikare arasteya alî ya dabeşbûnên hucreyê di IPR-ê de çêbike.
Tê pêşbînîkirin ku şaneyên di IPR de dê nekevin nav primordia, lê di şûna wê de bikevin nav internodan2,42,43. Rêzkirina transversal a dabeşbûna şaneyan di IPR de dibe ku bibe sedema rêxistinbûna tîpîk a rêzên dirêj ên paralel ên şaneyên epidermal di internodan de. Çavdêriyên me yên li jor hatine vegotin nîşan didin ku îhtîmal e ku sînyala GA di vê pêvajoyê de bi rêkxistina rêça dabeşbûna şaneyan rolek dilîze.
Windakirina fonksiyona çend genên DELLA dibe sedema bersiveke GA ya damezrîner, û mutantên della dikarin ji bo ceribandina vê hîpotezê werin bikar anîn44. Me pêşî qalibên îfadeya pênc genên DELLA di SAM de analîz kirin. Yekbûna transkrîpsiyonî ya xeta GUS45 eşkere kir ku GAI, RGA, RGL1, û RGL2 (bi rêjeyek pir kêmtir) di SAM de hatine îfade kirin (Wêneya Pêvek 11a-d). Hîbrîdasyona di cîh de bêtir nîşan da ku mRNA ya GAI bi taybetî di primordia û kulîlkên pêşkeftî de kom dibe (Wêneya Pêvek 11e). mRNA ya RGL1 û RGL3 li seranserê kaniya SAM û di kulîlkên kevintir de hatin tespît kirin, lê mRNA ya RGL2 li herêma sînor pirtir bû (Wêneya Pêvek 11f-h). Wênekirina konfokal a pRGL3::RGL3-GFP SAM îfadeya ku bi hîbrîdasyona di cîh de hatî dîtin piştrast kir û nîşan da ku proteîna RGL3 di beşa navendî ya SAM de kom dibe (Wêneya Pêvek 11i). Bi karanîna xeta pRGA::GFP-RGA, me dît ku proteîna RGA di SAM de kom dibe, lê pirbûna wê li ser sînor ji P4 dest pê dike kêm dibe (Wêneya Pêvek 11j). Bi taybetî, qalibên îfadeyê yên RGL3 û RGA bi çalakiya sînyala GA ya bilindtir di IPR de lihevhatî ne, wekî ku ji hêla qmRGA ve hatî tespît kirin (Wêne 4). Wekî din, ev dane nîşan didin ku hemî DELLA di SAM de têne îfade kirin û îfadeya wan bi hev re tevahiya SAM-ê vedihewîne.
Piştre me parametreyên dabeşbûna hucreyê di SAM-a cureya kovî (Ler, kontrol) û mutantên gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 rgl3-4 della pêncqat (cîhanî) de analîz kirin (Wêne 6a, b). Bi balkêşî, me guherînek girîng a îstatîstîkî di belavkirina frekansên goşeya dabeşbûna hucreyê de di SAM-a mutanta della global de li gorî cureya kovî (Wêne 6c) dît. Ev guherîn di mutanta della global de ji ber zêdebûna frekansa goşeyên 80-90° (%34.71 li hember 24.55%) û, di astek kêmtir de, goşeyên 70-80° (%23.78 li hember 20.18%) bû, ango, bi dabeşbûnên hucreyê yên transversal re têkildar in (Wêne 6c). Frekansa dabeşbûnên ne-transversal (0-60°) jî di mutanta della global de kêmtir bû (Wêne 6c). Frekansa dabeşbûna şaneyên transversal di SAM ya mutantê della global de bi girîngî zêde bû (Wêne 6b). Frekansa dabeşbûna şaneyên transversal di IPR de di mutantê della global de li gorî celebê kovî bilindtir bû (Wêne 6d). Li derveyî herêma IPR, celebê kovî belavkirinek yekrengtir a goşeyên dabeşbûna şaneyan hebû, lê mutantê della global dabeşbûnên tangensîyal ên wekî IPR tercîh kir (Wêne 6e). Me her weha arasteya dabeşbûna şaneyan di SAM ya mutantên pêncqat ên ga2 oxidase (ga2ox1-1, ga2ox2-1, ga2ox3-1, ga2ox4-1, û ga2ox6-2 de, paşxaneyek mutant a GA-neçalak ku GA tê de kom dibe, hejmar kir. Li gorî zêdebûna asta GA, SAM ya kulîlka mutant a pêncqat a ga2ox ji ya Col-0 mezintir bû (Wêneya Pêvek 12a, b), û li gorî Col-0, SAM ya pêncqat a ga2ox belavbûnek bi awayekî berbiçav a goşeyên dabeşbûna hucreyan nîşan da, ku frekansa goşeyê ji 50° ber bi 90° zêde bû, ango dîsa dabeşbûnên tanjensîyal tercîh kir (Wêneya Pêvek 12a-c). Bi vî awayî, em nîşan didin ku aktîvkirina damezrîner a sînyala GA û kombûna GA dabeşbûna hucreyên alî di IPR û mayî ya SAM de çêdike.
a, b Dîtbarîkirina 3D ya qata L1 ya Ler (a) ya boyaxkirî bi PI û mutantê della global (b) SAM bi karanîna mîkroskopiya konfokal. Dîwarên şaneyên nû yên ku di SAM (lê ne primordium) de di heyamek 10 demjimêran de çêbûne têne nîşandan û li gorî nirxên goşeya wan têne reng kirin. Wêneya hundurîn SAM di 0 demjimêran de nîşan dide. Barika rengîn li quncikê rastê yê jêrîn tê nîşandan. Tîra di (b) de nîşan dide mînakek pelên şaneyên hevrêzkirî di mutantê della global de. Ceribandin du caran bi encamên wekhev hate dubare kirin. ce berhevdana belavkirina frekansê ya arasteyên balafira dabeşkirina şaneyê di tevahiya SAM (d), IPR (e), û ne-IPR (f) de di navbera Ler û della global de. Nirxên P bi karanîna ceribandinek Kolmogorov-Smirnov a du-alî hatin bidestxistin. f, g Dîtbarîkirina 3D ya wêneyên konfokal ên SAM-ya boyaxkirî bi PI ya nebatan Col-0 (i) û pCUC2::gai-1-VENUS (j). Panelên (a, b) dîwarên şaneyên nû (lê ne primordia) nîşan didin ku di nav 10 demjimêran de di SAM de çêbûne. Ceribandin du caran bi encamên wekhev hate dubarekirin. h–j Berawirdkirina belavbûna frekansê ya arasteyên plana dabeşbûna şaneyê yên ku di tevahiya SAM (h), IPR (i) û ne-IPR (j) de di navbera nebatan Col-0 û pCUC2::gai-1-VENUS de cih digirin. Nirxên P bi karanîna ceribandina Kolmogorov-Smirnov a du-alî hatin bidestxistin.
Piştre me bandora astengkirina sînyala GA bi taybetî di IPR de ceriband. Ji bo vê armancê, me pêşvebirê kasa cotyledon 2 (CUC2) bikar anî da ku îfadeya proteînek gai-1 a neyînî ya serdest a ku bi VENUS ve girêdayî ye (di xeta pCUC2::gai-1-VENUS de) ajot bike. Di SAM-a celebê kovî de, pêşvebirê CUC2 îfadeya piraniya IPR-an di SAM-ê de, tevî şaneyên sînor, ji P4-ê û pê ve dimeşîne, û îfadeyek taybetî ya wekhev di nebatan pCUC2::gai-1-VENUS de hate dîtin (li jêr binêre). Belavbûna goşeyên dabeşbûna şaneyan li seranserê SAM an IPR-a nebatan pCUC2::gai-1-VENUS ji ya celebê kovî ne cûda bû, her çend bi awayekî nediyar me dît ku şaneyên bêyî IPR di van nebatan de bi frekansek bilindtir a 80-90° dabeş dibin (Wêne 6f-j).
Hatiye pêşniyarkirin ku rêça dabeşbûna şaneyan bi geometrîya SAM-ê ve girêdayî ye, bi taybetî jî stresa kişandinê ya ku ji hêla xwarbûna tevnê ve çêdibe46. Ji ber vê yekê me pirsî ka şeklê SAM-ê di nebatan de mutantê della global û pCUC2::gai-1-VENUS de hatiye guhertin an na. Wekî ku berê hatiye ragihandin12, mezinahiya SAM-ê ya mutantê della global ji ya cureya kovî mezintir bû (Wêneya Pêvek 13a, b, d). Hîbrîdasyona di cîh de ya CLV3 û RNA-ya STM berfirehbûna merîstem di mutantên della de piştrast kir û berfirehbûna alî ya nîşa şaneya reh nîşan da (Wêneya Pêvek 13e, f, h, i). Lêbelê, xwarbûna SAM di her du genotîpan de dişibihe hev (Wêneya Pêvek 13k, m, n, p). Me zêdebûneke wekhev di mezinahiyê de di mutanta çarqat a della ya gai-t6 rga-t2 rgl1-1 rgl2-1 della de dît bêyî guhertinek di xêzbûnê de li gorî celebê kovî (Wêneya Pêvek 13c, d, g, j, l, o, p). Frekansa dabeşbûna hucreyê di mutanta çarqat a della de jî bandor bû, lê bi rêjeyek kêmtir ji mutanta monolîtîk a della (Wêneya Pêvek 12d-f). Ev bandora dozê, digel nebûna bandorek li ser xêzbûnê, nîşan dide ku çalakiya RGL3 ya mayî di mutanta çarqat a Della de guhertinên di xêzbûna hucreyê de ku ji ber windabûna çalakiya DELLA çêdibin sînordar dike û ku guhertinên di dabeşbûna hucreyên alî de di bersiva guhertinên di çalakiya sînyala GA de çêdibin ne di guhertinên di geometriya SAM de. Wekî ku li jor hatî vegotin, pêşvebirê CUC2 îfadeya IPR di SAM de dimeşîne ku ji P4 dest pê dike (Wêneya Pêvek 14a, b), û berevajî vê, pCUC2::gai-1-VENUS SAM mezinahiyek kêmkirî lê xêzbûnek bilindtir hebû (Wêneya Pêvek 14c-h). Ev guhertina di morfolojiya pCUC2::gai-1-VENUS SAM de dibe ku bibe sedema belavkirinek cûda ya stresên mekanîkî li gorî celebê kovî, ku tê de stresên dorhêl ên bilind ji dûrbûnek kurttir ji navenda SAM dest pê dikin47. Wekî din, guhertinên di morfolojiya pCUC2::gai-1-VENUS SAM de dibe ku ji guhertinên di taybetmendiyên mekanîkî yên herêmî de ku ji hêla îfadeya transgenê ve têne çêkirin çêbibin48. Di her du rewşan de, ev dikare bandorên guhertinên di sînyala GA de bi zêdekirina îhtîmala dabeşbûna hucreyan di arasteya dorhêl/berfireh de qismî telafî bike, ku çavdêriyên me rave dike.
Bi hev re, daneyên me piştrast dikin ku sînyala GA ya bilindtir roleke çalak di arasteya aliyî ya plana dabeşbûna şaneyê di IPR de dilîze. Ew her weha nîşan didin ku xêzbûna merîstemê jî bandorê li arasteya plana dabeşbûna şaneyê di IPR de dike.
Rêzkirina beralî ya plana dabeşkirinê di IPR de, ji ber çalakiya sînyala GA ya bilind, nîşan dide ku GA pelek hucreya radyal di epidermisê de di nav SAM de pêş-rêxistin dike da ku rêxistina hucreyî ya ku paşê dê di navnoda epidermal de were dîtin diyar bike. Bi rastî, pelên hucreyî yên weha pir caran di wêneyên SAM yên mutantên della global de xuya bûn (Wêne 6b). Ji ber vê yekê, ji bo ku em fonksiyona pêşveçûnê ya qaliba fezayî ya sînyala GA di SAM de bêtir lêkolîn bikin, me wênekêşiya demkî bikar anî da ku rêxistina fezayî ya hucreyan di IPR de di nebatên celebê kovî (Ler û Col-0), mutantên della global, û nebatan transgenîk pCUC2::gai-1-VENUS de analîz bikin.
Me dît ku qmRGA nîşan da ku çalakiya sînyala GA di IPR de ji P1/P2 zêde bû û li P4 gihîşt lûtkeyê, û ev şêwaz bi demê re sabît ma (Wêne 4a–f û Wêneya Pêvek 8c–f, k). Ji bo analîzkirina rêxistina fezayî ya şaneyan di IPR de bi zêdebûna sînyala GA, me şaneyên Ler IPR li jor û li kêlekên P4 li gorî çarenûsa wan a pêşveçûnê ku 34 demjimêr piştî çavdêriya yekem hate analîzkirin, ango, ji du caran zêdetir plastîd, nîşan kir, ku rê da me ku em şaneyên IPR di dema pêşkeftina primordiumê de ji P1/P2 heta P4 bişopînin. Me sê rengên cûda bikar anîn: zer ji bo wan şaneyên ku di nêzîkî P4 de di primordiumê de hatine entegre kirin, kesk ji bo yên ku di IPR de bûn, û binefşî ji bo yên ku di her du pêvajoyan de beşdar bûn (Wêne 7a–c). Di t0 (0 h), 1-2 tebeqeyên şaneyên IPR li pêşiya P4 xuya bûn (Wêne 7a). Wekî ku tê hêvîkirin, dema ku ev xane dabeş bûn, ew bi piranî bi rêya plana dabeşbûna transversal hatin dabeş kirin (Wêne 7a–c). Encamên wekhev bi karanîna Col-0 SAM hatin bidestxistin (bi balkişandina ser P3, ku sînorê wê bi heman rengî di Ler de diqelişe), her çend di vê genotîpê de qata ku li sînorê kulîlkê çêbûye xaneyên IPR zûtir vedişêre (Wêne 7g–i). Bi vî rengî, qaliba dabeşkirina xaneyên IPR xaneyan di rêzên radyal de, wekî di nav girêkan de, pêşwext organîze dike. Rêxistina rêzên radyal û cihê xaneyên IPR di navbera organên li pey hev de nîşan dide ku ev xane pêşiyên nav girêkan in.
Li vir, me biyosensorek sînyala GA ya ratiometrîk, qmRGA, pêşxistiye ku destûrê dide nexşerêya hejmarî ya çalakiya sînyala GA ku ji berhevkirina konsantrasyonên GA û reseptora GA derdikeve holê di heman demê de destwerdana bi rêyên sînyala endojîn kêm dike, bi vî rengî agahdarî li ser fonksiyona GA di asta hucreyî de peyda dike. Ji bo vê armancê, me proteînek DELLA ya guhertî, mRGA, ava kir ku şiyana girêdana hevkarên têkiliya DELLA winda kiriye lê ji proteolîza ku ji hêla GA ve hatî çêkirin re hesas dimîne. qmRGA bersivê dide guhertinên hem eksojen û hem jî endojen di astên GA de, û taybetmendiyên wê yên hestiyariya dînamîk dihêlin ku nirxandina guhertinên cihî-demkî di çalakiya sînyala GA de di dema pêşveçûnê de were kirin. qmRGA di heman demê de amûrek pir nerm e ji ber ku ew dikare bi guhertina pêşvebirê ku ji bo îfadeya wê tê bikar anîn (heke hewce be) li ser tevnên cûda were adaptekirin, û ji ber xwezaya parastî ya rêya sînyala GA û motîfa PFYRE li seranserê angiosperm, ew ê îhtîmal e ku ji bo cureyên din veguhezîne22. Li gorî vê yekê, mutasyonek wekhev di proteîna SLR1 DELLA ya birincê de (HYY497AAA) jî hat nîşandan ku çalakiya tepeserkirina mezinbûnê ya SLR1 tepeser dike di heman demê de hilweşîna wê ya bi navbeynkariya GA-yê tenê hinekî kêm dike, mîna mRGA23. Bi taybetî, lêkolînên vê dawiyê yên li ser Arabidopsis nîşan dan ku mutasyonek asîda amînî ya yekane di domaina PFYRE (S474L) de çalakiya transkrîpsiyonê ya RGA guherand bêyî ku bandorê li şiyana wê ya têkiliyê bi hevkarên faktora transkrîpsiyonê re bike50. Her çend ev mutasyon pir nêzîkî 3 guheztinên asîda amînî yên di mRGA de hene be jî, lêkolînên me nîşan didin ku ev her du mutasyon taybetmendiyên cihêreng ên DELLA diguherînin. Her çend piraniya hevkarên faktora transkrîpsiyonê bi domainên LHR1 û SAW yên DELLA26 ve girêdidin,51, hin asîdên amînî yên parastî di domaina PFYRE de dikarin bibin alîkar ku van têkiliyan îstîqrar bikin.
Pêşveçûna navgirêkan taybetmendiyek sereke ye di mîmariya nebatan û başkirina berhemê de. qmRGA çalakiya sînyala GA ya bilindtir di hucreyên pêşeng ên navgirêkan ên IPR de eşkere kir. Bi hevberkirina wênekirina hejmarî û genetîkê, me nîşan da ku qalibên sînyala GA li ser balafirên dabeşkirina hucreyê yên dorhêl/berfireh di epidermisa SAM de li ser hev radiwestin, rêxistina dabeşkirina hucreyê ya ku ji bo pêşkeftina navgirêkan hewce ye şekil didin. Di dema pêşveçûnê de çend rêkxerên arasteya balafira dabeşkirina hucreyê hatine nas kirin52,53. Xebata me mînakek zelal peyda dike ka çalakiya sînyala GA çawa vê parametreya hucreyî rêk dixe. DELLA dikare bi kompleksên proteîna pêş-pêçayî re têkilî dayne41, ji ber vê yekê sînyala GA dikare arasteya balafira dabeşkirina hucreyê bi bandorkirina rasterast arasteya mîkrotubulên kortîkal rêk bixe40,41,54,55. Me bi awayekî nediyar nîşan da ku di SAM de, têkiliya çalakiya sînyala GA ya bilindtir ne dirêjkirin an dabeşkirina hucreyê bû, lê tenê anîzotropiya mezinbûnê bû, ku bi bandorek rasterast a GA li ser arasteya dabeşkirina hucreyê di IPR de lihevhatî ye. Lêbelê, em nikarin vê yekê ji holê rakin ku ev bandor dikare nerasterast jî be, bo nimûne bi nermbûna dîwarê şaneyê ya ji hêla GA ve hatî çalak kirin56. Guhertinên di taybetmendiyên dîwarê şaneyê de stresa mekanîkî çêdikin57,58, ku dikare bi bandorkirina li ser arasteya mîkrotubulên kortîkal bandorê li arasteya plana dabeşbûna şaneyê jî bike39,46,59. Bandorên hevbeş ên stresa mekanîkî ya ji hêla GA ve hatî çalak kirin û rêkxistina rasterast a arasteya mîkrotubulê ji hêla GA ve dibe ku di çêkirina şêweyek taybetî ya arasteya dabeşbûna şaneyê di IPR de ji bo destnîşankirina internodan de beşdar bibin, û lêkolînên din hewce ne ku vê ramanê biceribînin. Bi heman awayî, lêkolînên berê girîngiya proteînên TCP14 û 15 ên ku bi DELLA re têkilî datînin di kontrola avakirina internodê de destnîşan kirine60,61 û ev faktor dikarin çalakiya GA bi hev re bi BREVIPEDICELLUS (BP) û PENNYWISE (PNY) re navbeynkar bikin, ku pêşveçûna internodê rêk dixin û hatiye nîşandan ku bandorê li sînyala GA dikin2,62. Ji ber ku DELLA bi rêyên sînyala brassinosteroîd, etîlen, asîda jasmonîk û asîda absîsîk (ABA) re têkilî datînin63,64 û ev hormon dikarin bandorê li ser arasteya mîkrotubulan bikin65, bandorên GA li ser arasteya dabeşbûna hucreyê dibe ku ji hêla hormonên din ve jî werin navbeynkar kirin.
Lêkolînên sîtolojîk ên destpêkê nîşan dan ku hem herêmên hundir û hem jî yên derve yên SAM-a Arabidopsis ji bo pêşveçûna navgirêdan pêwîst in2,42. Rastiya ku GA dabeşbûna hucreyan di tevnên hundir de bi awayekî çalak rêk dixe12 piştgirî dide fonksiyonek dualî ya GA di rêkxistina meristem û mezinahiya navgirêdan di SAM de. Şêweya dabeşbûna hucreyan a arastekirî jî di tevnên SAM-a hundir de bi hişkî tê rêkxistin, û ev rêkxistin ji bo mezinbûna stûnê girîng e52. Dê balkêş be ku were lêkolîn kirin ka GA di heman demê de di rêkxistina plana dabeşbûna hucreyan di rêxistina SAM-a hundir de rolek dilîze, bi vî rengî destnîşankirin û pêşkeftina navgirêdan di nav SAM-ê de senkronîze dike.
Nebat di bin şert û mercên standard de (ronahiya 16 demjimêran, 22 °C) di axê an jî di navgîna 1x Murashige-Skoog (MS) (Duchefa) de ku bi 1% sukroz û 1% agar (Sigma) hatiye zêdekirin, di nav vîtro de hatin çandin, ji bilî ceribandinên hîpokotîl û mezinbûna reh ku tê de şitl li ser lewheyên vertîkal di bin ronahiya domdar û 22 °C de hatin çandin. Ji bo ceribandinên nîtratê, nebat di bin şert û mercên rojên dirêj de li ser navgîna MS ya guhertî (navgîna nebatan a bioWORLD) ku bi nîtrata têr (0 an 10 mM KNO3), 0.5 mM NH4-sûksînat, 1% sukroz û 1% A-agar (Sigma) hatiye zêdekirin, hatin çandin.
cDNAya GID1a ya ku di nav pDONR221 de hatibû danîn bi pDONR P4-P1R-pUBQ10 û pDONR P2R-P3-mCherry re ji nû ve hate tevlihevkirin di nav pB7m34GW de da ku pUBQ10::GID1a-mCherry çêbike. DNAya IDD2 ya ku di nav pDONR221 de hatibû danîn di nav pB7RWG266 de ji nû ve hate tevlihevkirin da ku p35S:IDD2-RFP çêbike. Ji bo çêkirina pGID1b::2xmTQ2-GID1b, perçeyek 3.9 kb li jor herêma kodkirina GID1b û perçeyek 4.7 kb ku cDNA ya GID1b (1.3 kb) û termînator (3.4 kb) dihewîne pêşî bi karanîna primerên di Tabloya Pêvek 3 de hatin zêdekirin û dûv re bi rêzê ve di nav pDONR P4-P1R (Thermo Fisher Scientific) û pDONR P2R-P3 (Thermo Fisher Scientific) de hatin danîn, û di dawiyê de bi pDONR221 2xmTQ268 re ji nû ve di nav vektora hedef a pGreen 012567 de bi karanîna klonkirina Gateway hatin hevber kirin. Ji bo çêkirina pCUC2::LSSmOrange, rêza pêşvebir a CUC2 (3229 bp li jorê ATG) û piştre rêza kodkirinê ya mOrange ya mezin a bi guheztina Stokes (LSSmOrange)69 bi sînyala lokalîzekirina navokî ya N7 û termînatora transkrîpsiyonê ya NOS bi karanîna pergala rekombînasyona 3-fragment Gateway (Invitrogen) di vektora hedefgirtina kanamycin a pGreen de hatin kom kirin. Vektora dualî ya nebatan bi rêzê ve di nav şaneya Agrobacterium tumefaciens GV3101 de hat danîn û bi rêbaza infiltrasyonê ya Agrobacterium di nav pelên Nicotiana benthamiana û bi rêbaza floral dip di nav Arabidopsis thaliana Col-0 de hat danîn. pUBQ10::qmRGA pUBQ10::GID1a-mCherry û pCLV3::mCherry-NLS qmRGA ji nifşên F3 û F1 yên xaçên têkildar hatin veqetandin.
Hîbrîdasyona RNA ya di cîh de li ser serê guliyên bi dirêjahiya nêzîkî 1 cm hate kirin72, ku hatin berhevkirin û tavilê di çareseriya FAA (3.7% formaldehîd, 5% asîda asetîk, 50% etanol) de ku pêşwext heta 4 °C hatibû sarkirin, hatin sabît kirin. Piştî dermankirinên valahiyê yên 2 × 15 hûrdemî, sabît hate guhertin û nimûne tevahiya şevê hatin înkubasyon kirin. cDNAyên GID1a, GID1b, GID1c, GAI, RGL1, RGL2, û RGL3 û sondên antîsensê yên ji bo 3′-UTR-ên wan bi karanîna primerên ku di Tabloya Pêvek 3-an de têne nîşandan, wekî ku ji hêla Rosier et al.73 ve hatî vegotin, hatin sentez kirin. Probeyên bi Dîgoksigenîn nîşankirî bi karanîna antîkorên dîgoksigenîn (dilopkirina 3000 qat; Roche, hejmara katalogê: 11 093 274 910) hatin tesbîtkirin, û beş bi çareseriya 5-bromo-4-kloro-3-îndolîl fosfat (BCIP, dilopkirina 250 qat)/nîtroblue tetrazolium (NBT, dilopkirina 200 qat) hatin boyaxkirin.
Dema şandinê: 10ê Sibatê 2025