Vê lêkolînê kujertî, binerdîtî û jehrîbûna bazirganiyê nirxandcypermethrinformulasyonên ji bo tadpolên anuran. Di testa akût de, hûrgelên 100-800 μg / L ji bo 96 demjimêran hatin ceribandin. Di ceribandina kronîk de, hûrgelên cypermethrin ên xwezayî (1, 3, 6, û 20 μg / L) ji bo mirinê hatin ceribandin, li dûv ceribandina mîkronukleus û anormaliyên navokî yên hucreyên xwînê yên sor ji bo 7 rojan. LC50 ya formulasyona cypermethrin a bazirganî ya ji bo tadpolan 273,41 μg L−1 bû. Di ceribandina kronîk de, giraniya herî bilind (20 μg L−1) ji% 50 zêdetir mirin encam da, ji ber ku wê nîvê tiliyên ceribandinê kuşt. Testa mîkronukleusê di 6 û 20 μg L−1 de encamên girîng nîşan da û gelek anormaliyên nukleerî hatin tesbît kirin, ku destnîşan dike ku formulasyona cypermethrin a bazirganî li dijî P. gracilis potansiyela genotoksîkî heye. Cypermethrin ji bo vê cureyê xeterek mezin e, ev nîşan dide ku ew dikare bibe sedema gelek pirsgirêkan û bandorê li dînamîkên vê ekosîstemê di demek kurt û dirêj de bike. Ji ber vê yekê, dikare were encamdan ku formulasyonên cypermethrin yên bazirganî bandorên jehrîn li ser P. gracilis hene.
Ji ber berfirehbûna berdewam a çalakiyên çandiniyê û sepana zexm yakontrolkirina kêzikantedbîran, ajalên avî gelek caran dikevin ber dermanên derman1,2. Qirêjiya çavkaniyên avê yên li nêzî zeviyên çandiniyê dikare bandorê li pêşkeftin û zindîbûna zîndewerên ne-armanc ên wekî amfîbiyan bike.
Amphibian di nirxandina matricên jîngehê de her ku diçe girîngtir dibin. Anuran ji ber taybetmendiyên xwe yên yekta yên wekî çerxên jiyanê yên tevlihev, rêjeyên mezinbûna bilez, statûya trofîk, çermê derbasbûyî10,11, girêdayîbûna bi avê ya ji bo ji nû ve hilberandinê12 û hêkên neparastî11,13,14, biyinîdekatorên baş ên qirêjkerên jîngehê têne hesibandin. Beqê avê yê piçûk (Physalaemus gracilis), ku bi gelemperî wekî beqê digirîn tê zanîn, wekî celebek biyînîdekator a qirêjiya pîstîkan e4,5,6,7,15. Cûre li Arjantîn, Uruguay, Paraguay û Brezîlyayê li avên rawestayî, herêmên parastî an herêmên xwedan jîngeheke guherbar tê dîtin1617 û ji ber belavkirina wê ya berfireh û tolerasyona li dijî jîngehên cihêreng, ji hêla dabeşkirina IUCN-ê ve aram tê hesibandin18.
Di nav amfîbîyan de piştî rûdana cypermetrînê bandorên binekujî hatine ragihandin, di nav de guheztinên behre, morfolojîk û biyokîmyayî yên di tadpolan de23,24,25, guhertina mirin û dema metamorfozê, guhertinên enzîmatîk, kêmbûna serkeftina helandinê24,25, hîperaktîvîtî26, astengkirina performansa 28wek terase, guhêrbarkirina performansa28wcho. Lêbelê, lêkolînên li ser bandorên genotoksîkî yên cypermethrin di amfibiyan de tixûbdar in. Ji ber vê yekê, girîng e ku meriv hestiyariya cureyên anuran ji cypermethrin re binirxîne.
Qirêjiya jîngehê bandorê li mezinbûn û pêşkeftina normal a amfîbiyan dike, lê bandora neyînî ya herî giran zirara genetîkî ya DNA ye ku ji ber vegirtina dermanên dermanan çêdibe13. Analîzkirina morfolojiya hucreyên xwînê biyinîdekatorek girîng a qirêjî û potansiyela jehrê ya maddeyek ji cûreyên çolê re ye29. Testa mîkronukleusê yek ji wan awayên ku herî zêde tê bikar anîn ji bo destnîşankirina genotoksîkiya madeyên kîmyewî yên li hawîrdorê ye30. Rêbazek bilez, bibandor û erzan e ku nîşanek baş a qirêjiya kîmyayî ya zîndewerên wek amfîbiyan e31,32 û dikare li ser rûbirûbûna qirêjên genotoksîk33 agahiyan bide.
Armanca vê lêkolînê ev bû ku bi karanîna ceribandinek mîkronukleus û nirxandina xetera ekolojîkî potansiyela toksîkî ya formûlasyonên cypermethrin ên bazirganî li ser tapikên piçûk ên avê binirxîne.
Mirinên kumulatîf (%) yên P. gracilis tadpoles di heyama akût a testê de li ber tansiyonên cihêreng ên cypermethrinê yên bazirganî derketine.
Mirinên kumulatîf (%) yên P. gracilis tadpoles di dema ceribandinek kronîk de li ber tansiyonên cihêreng ên cypermethrina bazirganî derketin.
Mirinên zêde yên ku hatine dîtin encama bandorên genotoksîkî yên di amfîbîyan de bû ku li ber tansiyonên cihêreng ên cypermethrin (6 û 20 μg / L) derketine, wekî ku ji hêla hebûna mîkronuclei (MN) û anormaliyên nukleerî di erythrocytes de têne xuyang kirin. Çêbûna MN di mîtozê de xeletiyan destnîşan dike û bi girêdana nebaş a kromozoman bi mîkrotubulan re, kêmasiyên kompleksên proteîn ên ku ji girtina kromozomê û veguheztinê berpirsiyar in, xeletiyên di veqetandina kromozomê de û xeletiyên di tamîrkirina zirara DNA-yê de38,39 ve girêdayî ye û dibe ku bi stresa ku bi pesticîdê ve hatî çêkirin4041 ve girêdayî be. Nerazîbûnên din di hemî hûrguliyên hatine nirxandin de hatine dîtin. Zêdebûna tansiyonên cypermethrin di dozên herî hindik (1 μg/L) û herî zêde (20 μg/L) de bi rêzê ve anormaliyên nukleerî yên di erythrocytes de 5% û 20% zêde kir. Mînakî, guheztinên di DNAya celebek de hem ji bo saxbûna kurt û hem jî ji bo demdirêj encamên cidî hene, di encamê de kêmbûna nifûsê, guheztina guncana hilberandinê, hevgirtin, windakirina cihêrengiya genetîkî, û guheztina rêjeyên koçberiyê. Hemî van faktor dikarin li ser zindîbûn û domandina cureyan bandor bikin42,43. Çêbûna anormaliyên erythroid dibe ku astengiyek di cytokinesis de nîşan bide, ku di encamê de dabeşbûna şaneyên nenormal (erythrocytes binucleated)44,45; navokên pirlobîk derbirînên perdeya nukleerî ne ku bi gelek lobên46 ve ne, dema ku anormaliyên din ên erythroid dibe ku bi zêdekirina ADNyê re têkildar bin, wek gurçikên nukleer/blebs47. Hebûna erythrocytes anucleated dibe ku astengiya veguhestina oksîjenê nîşan bide, nemaze di ava qirêj48,49. Apoptosis mirina şaneyê nîşan dide50.
Lêkolînên din jî bandorên genotoksîkî yên cypermethrin destnîşan kirin. Kabaña et al.51 hebûna mîkronuklei û guheztinên nukleerî yên wekî şaneyên binuklekirî û şaneyên apoptotîk ên di şaneyên Odontophrynus americanus de piştî ku 96 demjimêran li ber tansiyonên bilind ên cypermethrin (5000 û 10,000 μg L−1) derketin nîşan dan. Di P. biligonigerus52 û Rhinella arenarum53 de jî apoptoza ku ji hêla Cypermethrîn ve hatî çêkirin hate dîtin. Van encaman destnîşan dikin ku cypermethrin li ser cûrbecûr organîzmayên avî xwedan bandorên genotoksîkî ye û ku ceribandina MN û ENA dibe ku nîşanek bandorên bikujer ên li ser amfîbiyan be û dibe ku ji bo celebên xwemalî û nifûsên çolê yên ku bi jehrê re rû bi rû ne jî were sepandin12.
Formulên bazirganî yên cypermethrin xetereyek hawîrdorê ya bilind (hem akût û hem jî kronîk) çêdike, digel ku HQ ji asta Ajansa Parastina Jîngehê ya Dewletên Yekbûyî (EPA)54 derbas dibe ku heke di hawîrdorê de hebin, dibe ku bandorek neyînî li celebê bike. Di nirxandina metirsiya kronîk de, NOEC ji bo mirinê 3 μg L−1 bû, ev yek piştrast dike ku tansiyonên ku di avê de têne dîtin dibe ku ji bo celebê xetereyê çêbike55. NOEC-a kujer a ji bo larvayên R. arenarum ku li ber tevliheviya endosulfan û cypermethrinê derketin piştî 168 saetan 500 μg L−1 bû; ev nirx piştî 336 saetan daket 0,0005 μg L−1. Nivîskar destnîşan dikin ku her ku dirêjtir xuyangkirin, hûrgelên ku ji bo celebê zirardar in kêm dibe. Di heman demê de girîng e ku meriv ronî bike ku nirxên NOEC ji yên P. gracilis di heman demê de xuyangê de bilindtir bûn, ku destnîşan dike ku bersiva celebê ya cypermethrin-taybetî celeb e. Wekî din, di warê mirinê de, nirxa CHQ ya P. gracilis piştî rûbirûbûna cypermethrin gihîşt 64,67, ku ji nirxa referansê ya ku ji hêla Ajansa Parastina Jîngehê ya Dewletên Yekbûyî ve hatî destnîşan kirin54 bilindtir e, û nirxa CHQ ya larvae R. arenarum jî ji vê nirxê bilindtir bû (CHQ > 3836, piştî lêkolînê, 3836, nirxa referansê nîşan dide). ji bo çend cureyên amfîbiyan metirsiyek mezin e. Li ber çavan ku P. gracilis bi qasî 30 rojan hewce dike ku meriv metamorfozê temam bike56, meriv dikare were encamdan ku tansiyonên lêkolînkirî yên cypermethrin dibe ku bibe sedema kêmbûna nifûsê bi rêgirtina li mirovên vegirtî ku di temenek zû de bikevin qonaxa mezinan an hilberînê.
Di nirxandina xetereya mîkronuclei û anormaliyên navokî yên din ên erythrocyte de, nirxên CHQ ji 14.92 heta 97.00 diguhere, ku nîşan dide ku cypermethrin xetereyek potansiyel a genotoksîkî ji P. gracilis re jî di jîngeha wê ya xwezayî de heye. Li ber çavê mirinê, herî zêde giraniya pêkhateyên xenobiyotîk ên ku ji P. gracilis re tê tolerans kirin 4,24 μg L−1 bû. Lêbelê, hûrgelên bi qasî 1 μg / L jî bandorên genotoksîkî nîşan dan. Ev rastî dibe ku bibe sedema zêdebûna hejmara kesên nenormal57 û bandorê li pêşkeftin û nûvekirina cureyên li jîngeha wan bike û bibe sedema kêmbûna nifûsa amfîbiyan.
Formulasyonên bazirganî yên kêzika cypermethrin ji P. gracilis re jehra akût û kronîk a bilind nîşan dan. Rêjeyên mirinê yên bilindtir hatin dîtin, belkî ji ber bandorên jehrî, wekî ku ji hêla hebûna mîkronuklei û anormaliyên navokî yên erythrocyte, nemaze navokên serrated, navokên lobed, û navokên vezîkuler ve têne xuyang kirin. Wekî din, celebên lêkolînkirî xetereyên jîngehê yên akût û kronîk zêde nîşan dan. Van daneyan, digel lêkolînên berê yên koma me ya lêkolînê, destnîşan kir ku hêj formûlasyonên bazirganî yên cûda yên cypermethrin hîn jî bûne sedema kêmbûna çalakiyên acetilcholinesterase (AChE) û butyrylcholinesterase (BChE) û stresa oksîdatîf58, û di encamê de guhertinên di çalakiya avjeniyê de û xeletiyên devkî59 di P. gracilis, ku formûlasyona bazirganî û indeksa bilind heye. jehrbûna vê cureyê. Hartmann et al. 60 dît ku formûlasyonên bazirganî yên cypermethrin ji bo P. gracilis û cureyên din ên heman cinsê (P. cuvieri) li gorî neh dermanên din ên herî jehrîn in. Ev pêşniyar dike ku bi qanûnî pejirandî yên cypermethrin ji bo parastina jîngehê dibe ku bibe sedema mirina bilind û kêmbûna nifûsa demdirêj.
Ji bo nirxandina jehrîbûna kêzikê ya ji bo amfîbiyan lêkolînên din hewce ne, ji ber ku tansiyonên ku li hawîrdorê têne dîtin dibe ku bibe sedema mirina zêde û xeterek potansiyel ji P. gracilis re çêbike. Divê lêkolînên li ser cureyên amfîbiyan bên teşwîqkirin, ji ber ku daneyên li ser van zîndeweran kêm in, nemaze li ser cureyên Brezîlyayê.
Testa jehrê ya kronîk 168 saetan (7 rojan) di bin şert û mercên statîk de dom kir û hûrgelên binekujer ev bûn: 1, 3, 6 û 20 μg ai L−1. Di her du ceribandinan de, ji her koma dermankirinê 10 tadpol bi şeş dubareyan, ji bo bi tevahî 60 tadpolan ji her kombûnê re hatin nirxandin. Di vê navberê de, dermankirina tenê avê wekî kontrolek neyînî xizmet kir. Her sazûmanek ceribandinê ji firaqek şûşê ya sterîl bi kapasîteya 500 ml û tîrêjiya 1 tadpolê li ser 50 ml çareseriyê pêk dihat. Fîlm bi fîlima polîetîlenê hate pêçandin da ku pêşî li evaporbûnê bigire û bi domdarî hate hewa kirin.
Av bi kîmyewî hate analîz kirin da ku di demjimêrên 0, 96 û 168 demjimêran de giraniya dermanê were destnîşankirin. Li gorî Sabin et al. 68 û Martins et al. 69, analîz li Laboratory Analysis Pesticide (LARP) ya Zanîngeha Federal a Santa Maria bi karanîna kromatografiya gazê ya ku bi spektrometriya girseyî ya sêqalî ya çarqolî ve girêdayî ye (modela Varian 1200, Palo Alto, California, USA) hatin kirin. Tesbîtkirina mîqdarî ya dermanên di avê de wekî materyalê pêvek tê destnîşan kirin (Table SM1).
Ji bo ceribandina mîkronukleusê (MNT) û testa anormaliya navokî ya hucreya sor (RNA), ji her koma dermankirinê 15 tadpol hatin analîz kirin. Tadpol bi 5% lîdokaîn (50 mg g-170) hatin anestez kirin û nimûneyên xwînê bi qulkirina dil bi karanîna sîrînên heparînkirî yên yekcar hatin berhev kirin. Li ser slaytên mîkroskopê yên sterîl smelên xwînê hatin amadekirin, li hewa hatin zuwakirin, 2 hûrdem bi 100% metanol (4 °C) ve hate saxkirin, û dûv re 15 hûrdeman di tariyê de bi 10% çareseriya Giemsa re hate rijandin. Di dawiya pêvajoyê de, slides bi ava distîlkirî hatin şuştin da ku lekeya zêde jê bibe û li germahiya odeyê hişk kirin.
Bi kêmanî 1000 RBCs ji her tadpolê bi karanîna mîkroskopê 100 × bi armancek 71 hate analîz kirin da ku hebûna MN û ENA diyar bike. Bi tevayî 75,796 RBCs ji tadpolan li ser hûrbûn û kontrolên cypermethrin hatin nirxandin. Genotoxicity li gorî rêbazê Carrasco et al. û Fenech et al.38,72 bi destnîşankirina frekansa birînên nukleerî yên jêrîn: (1) şaneyên bê navok: şaneyên bê navok; (2) şaneyên apoptotîk: perçebûna navokî, mirina şaneya bernamekirî; (3) şaneyên binukleate: şaneyên bi du navokî; (4) gûçikên nukleerî an jî şaneyên bilbilê: şaneyên bi navokên ku bi derziyên piçûk ên parzûna nukleerî ne, bi mezinahiya mîkronukleyan şîn; (5) şaneyên karyolyzed: şaneyên bi tenê xêzkirina navokê bêyî maddeya navxweyî; (6) şaneyên binavkirî: şaneyên bi navokên ku di şiklê wan de şikestin an xêzên diyar hene, ku jê re navokên gurçikê jî tê gotin; (7) şaneyên lobulated: şaneyên bi şaneyên nukleerî ji vezîkulên navborî mezintir in; û (8) mîkroxane: şaneyên bi navokên kondenskirî û sîtoplazmaya kêmkirî. Guhertin bi encamên kontrola neyînî re hatin berhev kirin.
Encamên testa jehrê ya tûj (LC50) bi karanîna nermalava GBasic û rêbaza TSK-Trimmed Spearman-Karber74 hate analîz kirin. Daneyên ceribandina kronîk ji bo normalbûna xeletiyê (Shapiro-Wilks) û homojeniya cûdabûnê (Bartlett) pêş-ceribandin. Encam bi karanîna yekalî vekolîna veguheztinê (ANOVA) hatin analîz kirin. Testa Tukey ji bo berhevkirina daneyan di nav xwe de, û testa Dunnett ji bo berhevdana daneyan di navbera koma dermankirinê û koma kontrolê ya neyînî de hate bikar anîn.
Daneyên LOEC û NOEC bi testa Dunnett ve hatin analîz kirin. Testên statîstîkî bi karanîna nermalava Statistica 8.0 (StatSoft) bi asta girîngiya 95% (p <0.05) hatin kirin.
Dema şandinê: Mar-13-2025